支原體污染清除劑的作用

　　支原體是一類無細胞壁、能夠通過常規(guī)濾器的小型原核生物。它們在細胞培養(yǎng)過程中是一個常見的污染源，且因其體積微小和缺乏細胞壁，傳統(tǒng)的抗生素和過濾方法往往對其無效。支原體污染會對細胞的生理、生化特性產生顯著影響，進而影響研究結果的準確性和可靠性。因此，開發(fā)有效的支原體清除劑顯得尤為重要。

　　主要作用機制是通過抑制支原體DNA回旋酶的活性，進而抑制其DNA復制。DNA回旋酶是微生物DNA復制過程中的酶類，通過抑制這種酶，支原體清除劑能夠有效地阻止支原體的增殖和傳播。一些清除劑還具有廣譜抗菌作用，能夠同時清除細胞培養(yǎng)中的其他常見細菌。

　　支原體污染清除劑的特點

　　高效性：支原體清除劑能夠在短時間內（通常為3-7天）有效地清除細胞內外的支原體污染。這一特點使得研究人員能夠在較短的時間內恢復細胞的正常生長狀態(tài)。

　　低毒性：大多數支原體清除劑對細胞的毒性較低，可以在不影響細胞正常生長的情況下使用。這對于那些對細胞狀態(tài)要求較高的實驗尤為重要。

　　廣譜性：除了支原體，許多清除劑還對常見的革蘭氏陰性和陽性菌具有清除作用。這意味著它們可以替代傳統(tǒng)的雙抗（青霉素和鏈霉素），提供更廣泛的抗菌保護。

　　預防作用：一些支原體清除劑不僅能夠清除現(xiàn)有的污染，還具有預防支原體再次污染的功能。這通過在培養(yǎng)基中添加一定濃度的清除劑來實現(xiàn)，能夠有效降低環(huán)境污染對細胞培養(yǎng)的影響。

　　無耐藥性：支原體清除劑的活性成分通常是多肽類物質，這類物質不易導致支原體產生耐藥性。相比之下，傳統(tǒng)抗生素由于長期使用，容易導致耐藥菌株的產生。

　　支原體污染清除劑的使用方法

　　配制和稀釋：根據所培養(yǎng)細胞的特性，將支原體清除試劑配制成相應的培養(yǎng)基。通常建議現(xiàn)配現(xiàn)用，以確保試劑的有效性。推薦的稀釋比例為1:1000，即在10mL的培養(yǎng)基中加入10µL支原體清除劑。

　　細胞處理：棄掉舊的培養(yǎng)基，用PBS（磷酸鹽緩沖液）將細胞清洗干凈，然后加入含有支原體清除劑的新鮮培養(yǎng)基。每天更換一次含有清除劑的培養(yǎng)基，連續(xù)處理3天；或者每兩天更換一次，連續(xù)處理5-6天。

　　后續(xù)維護：處理完畢后，加入新鮮培養(yǎng)基，并可添加支原體預防劑以防止再次污染。為了維持清除效果，后期可按照1:2000~1:5000的比例稀釋后繼續(xù)培養(yǎng)細胞。

　　檢測和驗證：處理15日后，可以使用支原體檢測試劑盒進行檢測，確認支原體是否已被清除。定期進行支原體檢測也是防止再次污染的重要措施。

　　應用領域

　　支原體清除劑廣泛應用于各種細胞培養(yǎng)實驗中，特別是在那些對細胞狀態(tài)要求較高的研究領域，如癌癥研究、干細胞研究、分子生物學研究等。它也適用于生產生物制品，如疫苗、單克隆抗體等，確保產品的純凈性和安全性。